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使用制備液相色譜的工作流程和技巧

??????? 本文的重點(diǎn)是快速液相色譜和高效液相色譜。沒(méi)有一種完美的協(xié)議適合每一種分離目的。因此,建議為您的特定應(yīng)用程序優(yōu)化方法。通過(guò)本文中列出的建議以及一些前期閱讀和測(cè)試,您將輕松純化您正在尋找的組件。

??????? 一、快速液相色譜純化

??????? 使用快速色譜法進(jìn)行純化的缺點(diǎn)是該方法固有的分辨率較低。快速液相色譜柱使用更大的粒徑和柱容量,允許使用更多的起始材料,但以分辨率和純度為代價(jià)。如果化合物不需要更高的純度,或者如果下一步將進(jìn)行 HPLC,這可能是您的選擇。

??????? 1、確定溶劑系統(tǒng)

??????? 樣品的純度(即混合物中有多少化合物)可以使用薄層色譜法 (TLC) 和組分的相對(duì)極性進(jìn)行定性測(cè)定。使用 TLC 預(yù)先篩選最佳流動(dòng)相和固定相將節(jié)省時(shí)間和金錢(qián)。根據(jù)所使用的溶劑,您可能需要在通風(fēng)柜中運(yùn)行色譜柱,因?yàn)榇嬖跐撛诘奈kU(xiǎn)煙霧。

?液相色譜柱*DSC_6250

??????? 2、確定要使用的列

??????? 選擇分離柱時(shí)要考慮樣品量。色譜柱裝載量因粒徑和體積而異。一般來(lái)說(shuō),快速液相色譜柱的最大裝載量約為硅膠重量的 10%。較大的色譜柱能夠處理千克數(shù)量的色譜柱,但如果您沒(méi)有那么多起始材料,那么您只會(huì)在硅膠和額外的溶劑上浪費(fèi)金錢(qián)來(lái)運(yùn)行這些大型色譜柱。在確定液相分析柱、基質(zhì)和溶劑后,您就可以進(jìn)行快速分離了。

??????? 3、液相色譜柱

??????? 無(wú)論您是自己裝柱還是購(gòu)買(mǎi)一根預(yù)裝柱,按重量計(jì)算硅膠與化合物的比例(即硅膠:化合物)都將幫助您實(shí)現(xiàn)更有效的分離。恒譜生提供各種硅膠色譜柱,像uHPLCs高效液相C18-AQ分析柱對(duì)親水性和極性化合物具有更強(qiáng)的保留能力和選擇性。

?制備液相色譜柱-DSC_9280

??????? 如果包含了分離不太復(fù)雜的溶液需要 30:1 到 50:1 的比率,但更復(fù)雜的分離可能需要高達(dá) 120:1 的比率。手動(dòng)運(yùn)行色譜柱時(shí),切勿讓溶劑管線低于硅膠,否則氣孔會(huì)在硅膠上形成看起來(lái)像裂縫的長(zhǎng)線。這大大降低了分離的效率。

???????? 二、HPLC純化

?????? 在 HPLC 上運(yùn)行樣品相當(dāng)簡(jiǎn)單,因?yàn)樵诳焖僖合嗌V柱上預(yù)純化過(guò)程中確定的許多參數(shù)都可以應(yīng)用于此過(guò)程。如果您在沒(méi)有預(yù)純化步驟的情況下運(yùn)行 HPLC 分離,請(qǐng)考慮使用上面列出的指南來(lái)開(kāi)發(fā)合適的 HPLC 方法。使用 HPLC 時(shí)的另一個(gè)考慮因素是計(jì)算的背壓。由于 HPLC 色譜柱的粒徑更小,可實(shí)現(xiàn)更高質(zhì)量的分離,因此這些系統(tǒng)往往在高壓條件下運(yùn)行,而閃蒸分離的壓力相對(duì)較低。使用有關(guān)粒徑和形狀、色譜柱內(nèi)徑和溶劑規(guī)格的信息計(jì)算估計(jì)的背壓。

??????? 最后,與恒譜生技術(shù)支持專家進(jìn)行簡(jiǎn)短討論可以節(jié)省您寶貴的時(shí)間,并使您能夠在瞬間分離化合物!

?新聞底欄


發(fā)布于: 2022-04-08