C18 液相色譜柱柱效測(cè)試是評(píng)估色譜柱分離性能的重要實(shí)驗(yàn)。下面是 C18 液相色譜柱柱效測(cè)試的基本步驟：
1. 選擇適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)相：通常使用反相色譜法，選擇水和有機(jī)溶劑（如甲醇、乙腈等）的混合物作為流動(dòng)相，根據(jù)待測(cè)樣品的性質(zhì)和分離要求，調(diào)整流動(dòng)相的比例和 pH 值。
2. 制備樣品：將待測(cè)樣品溶解在流動(dòng)相中，使用微量進(jìn)樣器將樣品注入色譜柱。
3. 設(shè)置色譜條件：設(shè)置適當(dāng)?shù)纳V條件，如流速、柱溫、檢測(cè)波長(zhǎng)等。通常采用等度洗脫或梯度洗脫的方式，根據(jù)樣品的復(fù)雜程度和分離要求選擇合適的洗脫方式。
4. 記錄色譜圖：?jiǎn)?dòng)液相色譜系統(tǒng)，記錄樣品的色譜圖。根據(jù)色譜圖中的峰形、峰高、峰面積等參數(shù)，評(píng)估色譜柱的分離效率和柱效。
5. 計(jì)算柱效：根據(jù)色譜圖中的峰寬和保留時(shí)間等參數(shù)，可以計(jì)算出色譜柱的理論塔板數(shù)（N）和理論塔板高度（H），從而評(píng)估色譜柱的柱效。通常要求色譜柱的理論塔板數(shù)至少達(dá)到 3000 以上，理論塔板高度在 1-3 毫米之間。
需要注意的是，C18 液相色譜柱柱效測(cè)試需要在一定的實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行，包括流動(dòng)相的選擇、樣品的制備、色譜條件的設(shè)置等。同時(shí)，測(cè)試結(jié)果也受到儀器的穩(wěn)定性、數(shù)據(jù)處理方法等因素的影響。因此，在進(jìn)行 C18 液相色譜柱柱效測(cè)試時(shí)，需要嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，并采用合適的數(shù)據(jù)處理方法，以獲得準(zhǔn)確的測(cè)試結(jié)果。
發(fā)布于: 2023-08-28